公牛精液的冷冻方法

稀释后的精液，采用逐渐降温法在1-1.5小时内，使稀释的精液温度降到4-5℃，然后在这个温度下静置平衡2-4小时。

细管冻精采用与细管配套的器具进行。颗粒冻精采用氟板、铜纱网、尼龙网或铝板均可。安瓿冻精采用净容量为0.5毫升的硅酸盐中性玻璃安瓿。以上各种用具，在冻精时，精液容器与液氮面的距离一般保持1-1.5厘米，初冻温度零下80-零下120℃。

精液在冷冻前，应充分混匀，并检查精子活力。细管精液不论是用聚乙醇、钢珠封口，还是超声波塑料热合，都必须将瓶口封严。颗粒精液，每毫升稀释精液滴冻10±1粒，滴管应事先预冷，与平衡温度一致。操作要准确，颗粒大小要均匀，每滴完一头公牛精液后，必须更换滴管、氟板等用具。安瓿精液，用酒精喷灯火焰封口。在制作冻精时，防止在操作过程中精液温度回升。每冻完一批（头）精液，应立即放入液氮中浸泡，并计数、取样检查和包装。

采后的精液经检查合格后，要尽快稀释。冷冻保存稀释液具有保护精于免受或减少冻害的作用。配制冻精用的稀释保护剂，必须用新鲜的双重蒸馏水和卵黄，二级品以上的化学试剂。所用器具必须保证清洁、无菌。稀释比例，按采得精液的密度和活力确定，以保证解冻后每个输精剂量所含的直线前进的精子数不低于标准要求。稀释保护荆应现配现用，或配后放入4-5℃冰箱中备用，但时间不应超过1周。

1．细管用稀释液保护剂。配方为：

第一液：蒸馏水100毫升，柠檬酸钠2.97克，卵黄10毫升。

第二液：取第一液41.75毫升，加入果糖2.5克，甘油7毫升。

或者使用：脱脂奶82毫升，卵黄10毫升，甘油8毫升。

2．颗粒用冻精稀释保护液。配方为：12%蔗糖液75毫升，卵黄20毫升，甘油5毫升。

或者用：12%乳糖液75毫升，卵黄20毫升，甘油5毫升。

或者用：2.9%柠檬酸钠液73毫升，卵黄20毫升，甘油7毫升。

上述各类稀释保护剂，在每100毫升中应加青霉素、链霉素各5-10万国际单位。

3．安瓿用冻精稀释保护液可参照以上各种配方酌情使用。