父母代蛋种鸡场鸡白痢净化和维持的关键措施

鸡白痢是由鸡白痢沙门菌引起的急性败血性传染病，主要侵害雏鸡，以白痢、衰竭和败血症过程为特征，常导致大批死亡…。成年鸡感染后多呈慢性经过或不显症状，但带菌可垂直传播给下一代或通过生殖道污染禽蛋而造成种蛋的孵化率降低。目前，我国部分蛋鸡场鸡白痢沙门菌阳性率较高，蛋鸡沙门菌净化存在的主要问题有：缺乏快速、准确的病原和抗体检测技术；蛋种鸡净化不彻底，造成商品蛋鸡中感染逐代放大；饲料、饮水、饲养环境中沙门菌污染。我国养禽业鸡白痢沙门菌病的净化已开展了几十年，但由于工作的持续性、严格性均存在较大不足，国家也尚未制定相应的净化标准，迄今为止尚未有种禽公司(除从国外已净化公司完全引进祖代或者父母代的之外)宣布已达到完全净化的标准。同时，韦平课题组在对养鸡一条龙集团公司的跟踪检测发现，病原一直在种鸡群体内循环感染。因此，种群净化是防控该病的重要途径。

针对这些产业问题，国家蛋鸡产业技术体系进行了蛋鸡沙门菌净化技术的研究和示范，并将6此列为国家蛋鸡产业技术体系重点任务，其中包括蛋鸡和蛋品中沙门菌抗原和抗体快速检测平台技术和蛋种鸡群沙门菌的检疫净化控制技术，研制沙门菌快速检测试剂盒，应用建立的沙门菌病原和抗体快速检测平台，对蛋种鸡、商品蛋鸡进行全面的检疫，淘汰沙门菌阳性鸡和阳性种蛋，每个鸡群经过2—4次检疫净化，培育无鸡白痢和肠炎沙门菌感染的鸡群。

1 鸡白痢沙门菌的检测方法

对种鸡场采取定期检疫、淘汰带菌鸡同时结合生物安全措施，是目前控制和净化此病的最有效措施。从样品中分离鉴定出鸡白痢沙门菌是诊断鸡白痢较为可靠的方法。除此以外，应用较为广泛的主要有血清学方法和分子生物学方法。

1．1血清学方法

血清学试验是确定鸡群感染和流行情况的常规方法。全血平板凝集试验(PAT)、琼脂扩散试验(AGPT)n3、间接血凝试验(PHA)[8 3等方法在国内应用较多。OIE认为用脂多糖(LPS)作为包被抗原，是测定鸡群中鸡白痢、鸡伤寒沙门菌感染最特异的方法。

蒋维维等提出，PAT效率较血清平板凝集试验(SAT)高，但检出率不如后者。实践中还要综合考虑采血环节中技术人员的熟练程度、鸡的生理、器械的好坏、组员间的配合等因素，选择合适的检测技术。

曹春梅等引用胶体金标记鸡伤寒沙门菌LPS抗原，建立了一种抗原夹心法快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌抗体的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。与PAT相比，DIGFA具有灵敏度更高、早检测到抗体、阳性样品抗体滴度更高、准确性更强的优点。徐耀辉等…j以辣根过氧化物酶标记的沙门菌O，单克隆抗体3—47—0与包被的鸡白痢沙门菌脂多糖抗原，建立了一种抗体阻断ELISA以检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌感染。该方法具有很强的区分能力。在人工感染试验中，从第2周开始，该方法能从全部鸡只中检测到特异性抗体，比全血平板凝集试验(PAT)早1周时间，特异性和敏感性也更高。此外，该方法也能检测出与鸡白痢和鸡伤寒沙门菌有共同抗原的沙门菌感染产生的抗体。

1．2分子生物学方法

分子生物学诊断技术以其更高的特异性和灵敏性在鸡白痢沙门菌病诊断上的应用越来越多。根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的帕5基因在第237和598位碱基的不同，耿士忠等设计和合成了等位基因特异性PCR引物，建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法，该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌，检测灵敏度达100Pg DNA，与常规检测方法符合率为94．3％。薛俊龙等[1引用鸡白痢沙门菌／tic基因序列建立特异性PCR诊断方法，此PCR体系能检出50 pg以上的细菌DNA，阳性检出率和敏感性均高于常规检测方法。李求春[141从鸡白痢沙门菌中克隆了大小为840 bp的ipaJ基因序列，并获得了体外原核表达的大小为37 ku融合蛋白，该蛋白可与鸡白痢沙门菌阳性血清反应。对105株鸡白痢沙门菌菌株的PCR检测结果显示，所有的菌株都能扩增出ipaJ基因，该基因广泛存在于鸡白痢沙门菌菌株中，具有免疫原性。

同时，近两年王红宁课题组建立了多重PCR技术检测肠炎沙门菌、鸡白痢沙门菌和伤寒沙门菌的方法，沙门菌LAMP快速检测方法和一种沙门菌特异性免疫磁珠一多重PCR快速检测方法等。其中多重PCR检测技术重点优化扩增所用的Extag酶，降低了PCR的检测限，提高反应的灵敏度，比其他Tag酶具备更高的稳定性。该方法的建立，缩短了样品检测时间(8～16 h)，可重复性强(4次试验重复率大99％)，准确率高。沙门菌LAMP快速检测方法主要是在反应前体系中加人优化配置的钙黄绿素——MnCl：溶液作为指示剂，反应后可根据颜色变化肉眼判定结果，避免了反应后开盖判定带来的假阳性干扰。

沙门菌特异性免疫磁珠——多重PCR通过针对沙门菌外膜蛋白基因OmpC设计引物，进行该基因的扩增、克隆和表达，之后将纯化的蛋白作为抗原免疫新西兰兔，制备沙门菌特异性抗体并包被磁珠载体，构建沙门菌特异性免疫磁珠，将免疫磁珠同多重PCR相结合，并对方法进行灵敏性试验、特异性试验，建立了一种快速检测方法。这一方法的灵敏度比普通PCR方法高10倍，而且免疫磁珠能够对样品中的沙门菌进行浓缩富集，能够代替沙门菌繁琐的增菌过程，节约检测时间42—48 h。

2鸡白痢的传播方式和主要污染源

鸡白痢的传播方式较多，病鸡、带菌鸡是主要的传染源，通过带菌蛋传播是最常见的传播途径。带菌蛋有的是从带菌鸡所产的蛋而来，有的是健康蛋壳污染病菌而成为感染蛋。染菌蛋孵化会形成死胚或孵出病雏鸡。病雏鸡含有的大量病菌通过污染饲料、饮水、孵化器、育雏器等再次进行传播。与病雏鸡共同饲养的健康雏鸡可通过消化道，有时经呼吸道或眼结膜而受感染，被感染的雏鸡大部分死亡。耐过的鸡长期带菌，成为传染源，可周而复始地代代相传。

饲料和饮水沙门菌污染也是引起鸡白痢的重要原因。韩志辉¨51通过常规分离培养鉴定技术，对某饲料厂102份成品饲料、97份鱼粉、98份肉骨粉进行了沙门菌的分离与鉴定，结果从297份样品中分离到沙门菌45株，分离率15．2％。成品饲料阳性率17．6％(13／102)，鱼粉阳性率为14．4％(14／97)，肉骨粉阳性率为13．3％(13／98)。

鼠害、猫、狗、鸟和昆虫等带菌动物可直接感染易感鸡群或间接污染饲料原料、饲料成品或水源来感染鸡群。同时，病鸡粪便含有大量细菌，饲料、饮水和用具被污染后，是传播的重要因素。当饲养管理差，雏鸡拥挤，通风不良，温度过高或过低，以及发生其他疫病时，都可以成为鸡白痢的诱因。

3父母代蛋种鸡场鸡白痢的净化和防控

3．1鸡场选址建设要科学

鸡场的选址和布局决定了鸡场的生物安全体系是否健全，这是对疫病有效隔离及防控的重要一环。首先，充分考虑好鸡场的地理位置和外部环境。从鸡场的位置、占地面积、地形地势、土质、水源等方面进行全面的考虑。第二，在内部建设时，划分功能单元、合理布局，昆合种鸡场的育雏育成与商品代养殖舍要分区布局，区与区之间拉开距离，同时要满足各区全进全出的要求引。具备防鼠、鸟和昆虫等设施。生产区和生活区严格分开，生产区净道和污道分开，防止交叉感染。有一定距离的缓冲防疫隔离带，四周砌围墙或绿色隔离带与外界隔离。

3．2引种要规范

要选择一家管理规范、品种来源纯正、遗传性状比较稳定、种源干净且无垂直传播疫病或无主要垂直传播病的祖代种鸡场引种，要求祖代阳性率不超过0．1％，防止鸡沙门菌随种源带入。

3．3检疫净化鸡群

通过全血平板凝集试验，检出并淘汰阳性种鸡。种母鸡13～18周龄进行第一次抽检，抽检数量为10％，种公鸡全检，淘汰阳性鸡，之后每月全检；种母鸡40周龄起进行第二次抽检，抽检数量为10％，方法同上。如鸡白痢沙门菌阳性率超过0．3％，对种鸡群全检，淘汰阳性鸡，保证种鸡群白痢沙门菌阳性率低于0．3％。

3．4加强饲养管理

在养鸡生产中，育雏始终是关键，也是重点。温度、湿度、通风、光照应严格控制。雏鸡应给予颗粒化饲料，并少喂勤添。育雏的饮用水要定期检测，确保菌落总数达标且无沙门菌，育雏的第1周要饮用温开水，在饮水中适量添加高敏抗生素，预防鸡白痢沙门菌早期感染。

加强鸡舍的通风换气，保持鸡舍环境温度适宜，空气干燥，降低沙门菌生存和感染的可能性。在加强日常卫生管理和消毒措施及提高饲养管理水平的同时，尤其是鸡笼的滚蛋网要每天清扫干净，防止种蛋污染。对健康鸡群进行定期预防性用药，所使用的药物都具有高敏性。对采用人工受精的父母代蛋种鸡场，要采用一鸡一管人工授精方法，减少沙门菌的横向传播。

采取合理的通风模式。李保明口副建议采用能使风由侧墙直接进到天花板的模式。国外采用的纤维压制板，风的渗透能力强，通过这种板可以均匀输送冷空气，结合笼中间的管道通风效果较好。另外，对排出的空气进行过滤消毒处理，有利于持续保障场区环境。

优化免疫程序。部分阶段用联苗替代单苗，在减少油乳剂疫苗次数、减少应激的同时，确保种鸡群不发生疫情，减少继发沙门菌的几率。

3．5严格消毒

种鸡场要对鸡舍、种蛋、孵化场和用具等进行严格消毒。鸡舍要定期使用高效低毒的消毒液带鸡消毒，消毒液的品种每周要更换，循环使用。进入鸡舍的蛋托都要经过冲洗消毒处理；每2 h拣1次种蛋，立即熏蒸消毒，减少蛋壳表面的细菌侵入蛋内。每隔2周对鸡舍内的空气、尘埃及粪便采样，进行沙门菌检测，保证检测结果均为阴性。种蛋挑选要严格，脏蛋、次蛋都要剔除；种蛋选好人孵前再进行一次熏蒸消毒；要确保孵化厅和疫苗注射室正压送风、出雏厅和存雏厅是负压通风；孵化厅要定期全面消毒。每次出雏后，要对出雏厅、孵化器及用具进行彻底地清扫消毒。疫苗注射室要洁净，连续注射器、针头等用具要经高温消毒后使用，稀释疫苗最好采用一次性注射器。每小时更换1次连续注射器，每100只雏鸡更换1个针头。定期对孵化厅进行消毒内的空气和尘埃进行沙门菌检测，检测结果应为阴性。

在消毒液研发方面，郑炜超等n钔研制的新型微酸性电解水机，可连续稳定生产适用于畜禽场消毒的高浓度微酸性电解水，可快速杀灭各种病原菌和病毒，对于发展无害化绿色健康养殖具有重要的意义。微酸性电解水消毒对蛋鸡舍内沙门菌的净化效果，表明微酸性电解水对不同种类沙门菌的杀菌效果与作用时间、有效氯浓度和温度呈正比关系，对车辆表面的沙门菌的消毒效果显著高于复合酚。

3．6杜绝饲料、饮水污染鸡白痢沙门菌严把饲料进货渠道，仓库门口设挡鼠板，不使用易遭沙门菌污染的饲料原料，做到混合饲料当天生产，当天用完，避免污染。袋装饲料不应直接堆放在地板上，应堆放在木制托板上，以利通风。