为何猪瘟免疫合格率会相差40%？看这就明白了

猪瘟苗应有新的评价标准

成都天邦技术服务部 任丽

《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020）》和《全国兽医事业发展“十二五”规划》中已经明确提出：猪瘟在2015年部分区域达到净化标准，原种猪场达到净化标准；2020年进一步扩大净化区域，全国所有种猪场达到净化标准。这就对猪瘟的防控提出了明确要求，相应的，也是对猪瘟疫苗的免疫提出了更高的要求。

目前我国规模化养殖场均十分重视猪瘟疫苗免疫，80%以上的猪群免疫过猪瘟疫苗，种猪几乎是100%免疫，但是在一些地区，部份的小养殖场还是会有猪瘟发生，尽管是散发，但也给养殖场带来不小损失。并且根据一些猪场免疫监测结果，种猪群免疫平均合格率只有55.7%，而在免疫确实的情况下，种母猪免疫合格率应为90-95%以上，免疫合格率的差距带来的是猪群的猪瘟慢性感染，是我国猪瘟疫情长期持续存在和散发流行恶性循环的主要根源。

我国猪瘟OIE相关实验证明C株能抵抗基因1.1、基因2.1、2.2亚群的攻击；英国VLA实验证实C株能抵抗基因2.1、基因3.3亚群的攻击。相关研究文献也指出中国猪瘟病毒流行株基因组稳定，并证实C株弱毒活疫苗对我国流行毒株能够有效保护。因此无论是实验室还是实际生产上，都证实我们目前使用的猪瘟兔化弱毒疫苗（C株）对猪瘟防控依然是最优秀的毒株选择。那么疫苗品质的关键就在于猪瘟疫苗的抗原含量及其稳定性，不能用起来忽高忽低，时好时坏。而要使得猪瘟疫苗具有较好的稳定性，其前提是有一套稳定可控的评价标准。

猪瘟疫苗TCID50评价方法更稳定可靠

我国猪瘟疫苗生产技术从早期的原代细胞苗到现在的传代细胞苗，又从之前的转瓶培养生产到现在的悬浮培养生产。如今，在标准种毒、标准生产细胞、质量控制方面得到了明显的改进，但是对猪瘟疫苗的评价标准却依然停留在最早的脾淋苗、组织苗。

按照现行的《兽用生物制品规程》要求，我国猪瘟疫苗采用兔体感染量（RID）来测定疫苗效价。但实际上RID方法存在以下问题：检验兔个体差异（种属、种系、性别、年龄、生理及临床表现）大，实际上用于标准动物的日本大白兔如今已经找不到了；成本高、重复少且达不到统计学要求；检验周期长（有时需要1个多月）；饲喂及管理差异等。

南京农业大学杜念兴教授曾经在1998年《猪瘟的回顾与展望》中写道：猪瘟兔化弱毒几十年来一直采用兔体反应（RID）测毒。按规程只用一个稀释度，2只兔子，其实一个稀释度不可能测出毒价，只分一次通过、重检通过和不通过三个档次。我们曾建立微量细胞培养ELISA，用以检测C系猪瘟兔化弱毒，效果很好。对不同档次的细胞毒进行检测（结果见图1）。可见合格的细胞毒（包括一次通过和二次通过）中，毒价最高和最低的间差距高达1000倍。

这也就说明了，在合格的RID下，有的抗原含量高，有的抗原含量低，其差异可达1000倍之巨，中国兽医药品监察所研究员王琴也表示，使用RID方法检测，会出现同样的RID下，TCID50却差异大的情况。这也就导致了在这种控制方法下生产的疫苗，容易出现质量不稳定的现象。

图1.用微量细胞培养ELISA测定兔化毒TCID50与兔体测毒比较

鉴于以上在实际应用中存在的问题，建立标准化、特异、准确定量的替代方法对提高疫苗质量监控迫在眉睫。

目前包括中国兽医药品监察所OIE猪瘟参考实验室以及成都天邦等研究机构和疫苗生产企业均表示，使用细胞半数感染量（TCID50）方法进行猪瘟疫苗的检测更科学更准确，并且已经在着手致力于推动对猪瘟疫苗评价国家标准的修改。而在中国大陆之外，中国台湾及韩国对猪瘟疫苗的效价检测标准均是每头份猪瘟疫苗活病毒含量≥103.5TCID50。

图2.CSFV特异性荧光

成都天邦自2013年便开始致力于对猪瘟疫苗TCID50评价方法的建立，并在猪瘟疫苗效价检测上使用双重标准进行评定，一是国家标准RID，每头份猪瘟疫苗需要达到15000RID以上；同时满足活病毒含量≥104.0TCID50/头份。

使用这种双重检验标准制备的高品质疫苗才能保证疫苗批次间的稳定性，才可以指导确定猪瘟疫苗的准确免疫剂量，也才能在猪场防控猪瘟的战疫中起真正的作用。

BVDV检测标准建立保障猪瘟疫苗更纯净

除了猪瘟疫苗抗原评价标准，成都天邦还建立了猪瘟疫苗原辅料中牛病毒性腹泻-粘病病毒（BVDV）污染的清除标准。

BVDV与猪瘟同属黄病毒科、瘟病毒属，存在抗原相关性。猪瘟疫苗中污染BVDV后，猪瘟的有效免疫原量会减少，致使临床使用后发生猪瘟免疫失败。BVDV可引起猪只发生类似猪瘟的疫病，导致疫苗接种猪发病或死亡。《中国兽药典》中规定，BVDV的检测方法为免疫荧光法，该方法检验周期较长，且检验用细胞培养仍然要用到血清，对操作者的技术要求较高。因此建立快速、敏感、特异和准确的方法势在必行。

成都天邦使用双重标准进行活疫苗中BVDV外源病毒的检测，即《中国兽药典》规定的免疫荧光法，和自己建立的荧光定量RT-PCR方法，该方法灵敏度好，精确度可达到1.5个TCID50的BVDV，不会造成猪瘟疫苗中BVDV“漏检”；特异性良好，不会把疫苗中的猪瘟病毒“误检”为BVDV，不仅应用于猪瘟疫苗成品的检测，还贯穿于整个生产过程，对所有的原辅材料尤其是血清及半成品抗原、成品疫苗进行快速检测，保证稳常佳产品中BVDV外源病毒阴性。

耐热保护剂让疫苗流通储存不受损

以上的两种标准均是为了保证猪瘟疫苗在出厂时的质量稳定，那么出厂之后呢？还要关注疫苗在打到猪身上的时候还是不是那个合格稳定的疫苗。因此成都天邦又建立了活疫苗流通与储存温度标准。

国发办【2017】5号《国务院办公厅关于进一步加强疫苗流通和预防接种管理工作的意见》中提出：加强疫苗流通全过程管理，强化储运的冷链管理。传统猪瘟疫苗要求在－15度保存，这在运输过程中根本无法做到，这使疫苗极易受温度变化的影响，特别是在夏季高温时，疫苗效价会收到极大损害，最终导致猪只免疫剂量和效果不确实。而成都天邦早在2007年就首家获得猪瘟疫苗耐热保护剂批文，在2-8℃情况下进行保存和运输，保质期可达24个月，每批产品均要接受中监所长达7天的37℃耐老化实验而效价不降低一个滴度。这使得疫苗在运输过程中基本不受影响。

综上用以上3个新标准为猪瘟活疫苗保驾护航，才能在实际生产中更好地防控猪瘟，早日达到国家对猪瘟的防控要求！