种鸡减蛋综合症

引起种鸡减蛋病的病原为一种腺病毒，对鸡、火鸡及鸭的红细胞有凝集性，这与其他腺病毒只能凝集哺乳动物红细胞不同。病毒存在于鸭体内及病鸡的输卵管、咽喉部及病鸡粪便和蛋内。它不能使鸭、鹅发病，病毒对外界抵抗力较强。

1．病原特性 鸡减蛋综合征(EDS-76)病毒是腺病毒属的病毒。病毒粒子大小为76—80纳米，呈20面体对称，是无囊膜的双股DNA病毒，衣壳的结构，壳粒的数目等均具有典型腺病毒的特征。对乙醚不敏感，pH耐受范围广，如pH3时不死。EDS-76病毒能在鸭胚和鹅胚中增殖，也能在鸭肾细胞、鸭胚成纤维细胞、鸭胚肝细胞、鸡胚肝细胞、鸡肾细胞和鹅胚成纤维细胞培养物上良好生长。

2．病料的采取和处理 采取病鸡的输卵管、泄殖腔、鼻黏膜、变性卵泡、无壳软蛋等作为被检材料。把组织磨碎制成乳剂。冻融3次，离心，取上清液，加入青、链霉素各1000单位(微克)／毫升，置于4度作用2小时。对其他病料作无菌处理后，供病毒分离和攻毒用。

3．病原的分离培养

(1)鸡胚接种 取处理过的病料接种9～12日龄鸭胚的尿囊腔，38℃继续孵育，弃去24小时内死胚，收获48～96小时存活的鸭胚尿囊液，将收获的鸭胚尿囊液继续接种10—12日龄鸭胚尿囊腔进行传代培养。每代鸭胚尿囊液都用鸡红细胞做血凝试验检测尿囊液中的血凝素，即使对阴性尿囊液也应至少传2—3代。

(2)细胞培养 将病料接种于已长成单层的鸭胚成纤维细胞，37℃继续培养数日，观察致细胞病变效应(CPE)和核内包涵体，然后收获，反复冻融，做血凝试验，如无CPE，则应至少盲传2～3代。

4．病毒的鉴定

(1)人工感染试验 用分离毒株接种无EDS-76抗体的产蛋鸡，可观察到与自然病例相同的症状及产蛋异常变化。

(2)用已知EDS-76阳性血清与收获的HA阳性尿囊液做HI试验，确定之。

此外，免疫荧光和病毒中和试验也可用于病毒的鉴定。

【流行病学】

1．易感动物和发病日龄。各日龄的鸡均可感染，产褐色壳蛋的肉用鸡的种母鸡最易感，产白色壳蛋的母鸡患病率低。在产蛋高峰期和接近产蛋高峰期发病高潮，其自然宿主是鸭或野鸭。

2．传播途径 鸡体内的病毒可经种蛋传染给下代雏鸡，这是本病传播的重要方式，病毒在体内长期潜伏，一直到产蛋高峰期才发病，另一种传播方式是污染饲料、饮水，经消化道感染健康鸡，传播缓慢，同时有些弱毒疫苗是由非特异性病原的鸡胚制作的，其中含有EDS－76，注射或饮水且易于传播本病。鸡鸭混养，注射针头也可以传播此病。

各种年龄的鸡对EDS-76病毒都易感。鸭、鹅是自然宿主。有报道珍珠鸡可被自然感染，并可产生软壳蛋，未见鸟骨鸡、火鸡、雉鸡在自然条件下被感染。从某些野禽(白鹭、鲱鱼鸥、猫头鹰、鹳等)的血清血检出了EDS-76病毒抗体。

病毒经受精卵垂直传播是EDS-76病毒的主要传播方式。鸡与鸡之间接触以及被病毒污染的饮水、饲料和器具，带毒的鸭、鹳和某些野禽，也起到传播的作用。

EDS-76病毒水平传播的速度较慢，且有时呈间断性，有资料介绍，经11周的时间，在笼养鸡舍才引起全群感染，在垫草上鸡与鸡之间的传播通常较快。

母鸡经口腔途径感染后，病毒先在鼻黏膜进行复制，形成病毒血症。被感染后3—4天，病毒在全身淋巴组织，尤其是脾和胸腺中复制。在感染后7～20天，病毒侵入生殖系统，在输卵管狭部蛋壳分泌腺大量复制。在性未成熟前不致使鸡发病，至性成熟前、后，可能是由于激素和应激因素的作用，使病毒活化，在蛋鸡进入产蛋高峰期前后(一般在26—45周龄)出现蛋壳异常、蛋体畸形，产蛋量突然下降(一般达20％～5096)，持续期一般达6—10周。有的被感染鸡群出现产蛋期推迟，产蛋率上升缓慢，不能达到产蛋高峰期应出现的产蛋率等流行特点。

鸡被EDS-76病毒人工感染第5—6天，用血凝抑制试验或间接免疫荧光试验可测出抗体的存在，4～5周时抗体效价达到高峰。感染鸡在出现高HI抗体效价时仍能排毒，而有些排毒鸡则不出现抗体。有些鸡群含有经卵而受感染的鸡，在生长期间并不显示出抗体，而只是随着出现临床症状才显示出抗体。因此，在存在本病的地区的一个鸡群，即便在20周龄时，所有的鸡经血清学检验为阴性，也不能保证没有受到感染。抗体可通过卵黄传递，这种经被动免疫而获得的抗体的半衰期为3天。雏鸡所获得的母源抗体近于不能测出的时候，才能诱发主动抗体的形成。

【病理学】通常变化不明显，在产无壳蛋和异常蛋的鸡可见输卵管子宫粘膜肥厚，且有白色渗出物和干酪样物，有时可见输卵管萎缩，粘膜有炎症，这些变化无诊断意义。

1．临床病理学 本病大体病变不明显，有时可见卵巢静止不发育和输卵管萎缩，少数病例可见子宫水肿，腔内有白色渗出物或干酪样物，卵泡有变性和出血现象。人工感染时可见脾充血、肿大，偶见子宫内有薄膜包裹的卵黄和少量水样蛋清。

2.病理组织学 主要表现为输卵管和子宫黏膜明显水肿，腺体萎缩，并有淋巴细胞、浆细胞和异嗜性白细胞浸润，在血管周围形成管套现象，上皮细胞变性坏死，在上皮细胞中可见嗜伊红的核内包涵体，子宫腔内渗出物中混有大量变性坏死的上皮细胞和异嗜性白细胞。少数病例可见卵巢间质中有淋巴细胞浸润，淋巴滤泡数量增多，体积增大，脾脏红、白髓不同程度增生。

【症状】初产鸡群产蛋率上升到50％以后即开始出现症状，大多数发生在26～32周龄(此时正值产蛋高峰期)，病鸡食欲、精神、粪便均正常，但输卵管中蛋壳分泌腺受病毒破坏，卵泡发育排卵受影响，出现产蛋减少和蛋壳变劣，蛋的破损率高。开始发病时出现壳色变白，产蛋量减少，逐渐下降20％～40％，同时出现大量薄壳、软壳、无壳和畸形蛋。蛋壳表面粗糙呈砂纸样，正常蛋仅占70％左右，有些鸡还将所产的蛋吃掉，病程一般持续4～6周，随后逐渐恢复，经10周恢复正常，有此病的鸡蛋不宜作种蛋孵化。

EDS-76最初症状是有色蛋壳的色泽消失。紧接着产生薄壳、软壳或无壳蛋。薄壳蛋的壳质经常是粗糙的。病鸡群生产的外观正常的蛋受精率和孵化率不呈现显著异常。但也有报道，种鸡群发生EDS-76时，种蛋的孵化率降低，同时出现弱雏。发病鸡群的产蛋量突然下降。产蛋量下降通常发生于产蛋高峰期前后，产蛋量下降可达20％～50％，持续期为4—10周左右，产蛋量的恢复十分缓慢。有的早期感染EDS-76的鸡群出现产蛋期推迟，产蛋率上升缓慢，且达不到产蛋高峰应有的产蛋率。褪色的薄壳蛋、脆壳蛋往往出现在产蛋减少前24～48小时，这一特征症状有助于将本病区别于其他病因引起的产蛋减少症。

【诊断】凡有产无壳蛋、软皮蛋、破蛋及褐壳蛋褪色等异常蛋的产蛋下降，即可怀疑本病，确诊需经实验室诊断。由于该病症有关方面与维生素缺乏、微量元素缺乏及传染性支气管炎、新城疫症状相似，必须作鉴别诊断。

传染性支气管炎引起产蛋下降的同时有呼吸道症状，产畸形小蛋，而减蛋综合征产薄壳蛋、软壳蛋和无壳蛋，易于区别；而非典型新城疫则在产蛋减少的同时有消化道症状，如下痢、全群采食减少，有个别死亡现象，剖检死鸡，消化道出血，产出的蛋苍白，而元软壳和无壳蛋；而维生素矿物质缺乏时，产蛋减少和蛋壳变劣为逐渐发生，改善饲料5～7天后即可恢复正常，而减蛋综合征则持续4～6周。有产蛋下降的疾病还有传染性脑脊髓炎、鸡败血支原体病及包涵体性肝炎等。但患病鸡所产的蛋基本正常。

[血清学诊断要点]

1．血凝(HA)试验和血凝抑制(HI)试验

(1)HA试验 一般采用微量法，在微量凝集反应板上，从第2孔至11孔，用微量移液器每孔加人生理盐水0．05毫升，第1、2孔分别加10倍稀释的病毒0．05毫升，从第2孔起，依次作倍数稀释，至第10孑L，最后弃0．05毫升。每孔加人1％鸡红细胞悬液0．05毫升，设不加病毒的红细胞对照孔，立即在微量振荡器上摇匀，置室温(18～2513)30分钟左右观察结果。以使红细胞发生100％凝集的最高稀释度作为血凝价。

(2)HI试验 常采用微量法，血清直接在抗原中作倍数稀释。操作时先取4单位抗原依次加入2—11孔，最后孔(12孔)加生理盐水或PBS。第1孔加8单位的抗原。然后吸取待检血清0．05毫升最后孔中(血清对照)，混合后吸0．05毫升于第1孔，依次倍比稀释至11孔，弃去0．05毫升，置室温(18～25℃)下作用10分钟，再每孔加入1％鸡红细胞悬液0．05毫升，振荡混合静置30分钟，判定结果。以完全抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的HI滴度，每次测定应设已知滴度的标准阳性血清对照和4单位病毒对照。待检血清的抑制价在8倍以上为阳性。

2．琼脂扩散试验 抗原的制备可将种毒经尿囊腔接种于13—14日龄鸭胚，接种后96小时收集鸭胚尿液，经3000转／分离心30分钟，取上清，加入甲醛使终浓度为0．2％。置37度温箱中作用48小时后，经40 000转／分离心2小时，弃上清，沉淀物按原液量的1／20加入灭菌生理盐水，用注射器充分吹打溶解，再经3 000转／分离心20分钟，取上清。将沉淀物再加少量灭菌生理盐水充分吹打离心。将每次离心的上清液混合在一起，用灭菌生理盐水补充到尿液的1／10量，作为琼扩抗原。琼脂板的制备，是在100毫升pH5。6～6．4的PBS中加入氯化钠8克、琼脂糖1克、10％的硫柳汞0．1毫升，充分煮沸后，每个平皿注入18毫升，待琼脂自然凝固后，置普通冰箱中保存备用。试验时打孔经4毫米、孔间距3毫米的7孔梅花孔，中心孔加抗原，周围孔加待检血清、阴性血清和阳性血清，置3713温箱中，保持一定湿度，经24—48小时观察结果。：抗原与待检血清间出现特异性沉淀线者，判为阳性。

3．其他血清学诊断方法 病毒中和试验也是比较敏感、特异的方法。EDS－76病毒能致CPE，并产生核内包涵体，这种作用可被特异性抗血清所中和，因此，本法也用于检验EDS-76病毒抗原或血清抗体。免疫荧光试验与HI试验一样敏感，操作方法同I型腺病毒的荧光诊断法。至今国内外学者已建立了常规ELISA竞争性EILSA和斑点ELISA用于EDS-76的诊断。

【防治措施】本病无特异性治疗方法，只能对症治疗，可适当添加微量元素和维生素，可促进其产蛋恢复。预防接种是防制本病的根本措施，可用减蛋综合症油乳剂苗在120日龄与传染性支气管炎苗、新城疫苗同时注射免疫，如为种鸡，为确保其免疫效果：可在70日龄先免疫一次减蛋综合症油乳剂苗，再在120日龄免疫一次。在进行其他弱毒苗免疫时，应选用无其他特殊病原(SPF)尤其是不含减蛋综合征病毒的疫苗，饲养管理上应注意鸡、鸭、鹅不能混养，搞好平时的卫生消毒工作。

1.免疫预防 已研制出EDS-76油乳剂灭活苗、鸡减蛋综合征蜂胶苗等，于鸡群开产前2—4周注射0．5毫升，由于本病毒的免疫原性较好，对预防减蛋综合征的发生具有良好的效果。可保护一个产蛋周期。

2.卫生管理措施 对该病尚无特效药物进行治疗，所以必须加强卫生管理措施。

(1)由于EDS-76是垂直传播，因此，因注意不能使用来自感染鸡群的种蛋。

(2)病毒能在粪便中存活，具有抵抗力，因此要有合理有效的卫生管理措施。严格控制外人及野鸟进入鸡舍，以防疾病传播。

(3)对肉用鸡采取“全进、全出”的饲养方式，对空鸡舍全面清洁及消毒后，空置一段时间方可进鸡。对种鸡采取鸡群净化措施，即将40周龄以上的鸡所产蛋孵化成雏后，分成若干小组，隔开饲养，每隔6周用HI验测定抗体，一般测定10％～25％的鸡，淘汰阳性鸡。直到40周龄时，100％阴性小鸡继续养殖。